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抗體原料

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人血紅蛋白單克隆抗體

發(fā)布日期:2019-01-09 08:53瀏覽次數(shù):

大便隱血(FOB)(亦稱大便潛血)是指消化道少量出血,紅細(xì)胞被消化破壞,糞便外觀無(wú)異常改變,肉眼和顯微鏡下均不能證實(shí)的出血。在臨床消化道惡性腫瘤早期20%的患者可出現(xiàn)隱血試驗(yàn)陽(yáng)性,晚期病人的隱血陽(yáng)性率可達(dá)到90%以上,并且可呈持續(xù)性陽(yáng)性;消化道出血,消化道潰瘍病人糞便隱血試驗(yàn)多呈間斷性陽(yáng)性;痢疾、直腸息肉、痔瘡出血等也可使糞便中出現(xiàn)較多紅細(xì)胞導(dǎo)致隱血試驗(yàn)陽(yáng)性。因此,大便隱血檢查可作為檢測(cè)各種原因所致的消化道出血的重要檢測(cè)試驗(yàn),是較為有效的方法。
FOB檢測(cè)靶物質(zhì)是大糞中的人血紅蛋白(Hb)。Hb的結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜,每個(gè)Hb分子由1個(gè)珠蛋白和4個(gè)血紅素(又稱亞鐵原卟啉)組成。Hb分子是由4個(gè)單體構(gòu)成的四聚體。不同Hb分子的珠蛋白的多肽鏈的組成不同。成年人Hb(HbA)的多肽鏈由2條α鏈和2條β鏈構(gòu)成,為α2β2結(jié)構(gòu)。胎兒Hb(HbF)由2條α鏈和2條γ鏈構(gòu)成,為α2γ2結(jié)構(gòu)。出生后不久HbF即被HbFA所取代。每條α鏈含141個(gè)氨基酸殘基,每條β鏈含146個(gè)氨基酸殘基。
為了克服Hb單抗制備中的技術(shù)難題,本公司研發(fā)團(tuán)隊(duì),從人紅細(xì)胞制備純化人Hb蛋白,并以此抗原免疫小鼠,經(jīng)過(guò)多年不斷融合,篩選,從幾百個(gè)單克隆雜交瘤細(xì)胞株中成功篩選出2株配對(duì)良好,抗原位點(diǎn)高度保守的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株。用其制備的FOB金標(biāo)檢測(cè)試劑產(chǎn)品對(duì)四百多份大便隱血樣本進(jìn)行性能評(píng)價(jià),結(jié)果顯示自制Hb單抗具有較高的抗原位點(diǎn)保守性及較強(qiáng)的活性效價(jià)及親和力。

  • 稀釋線性

用0.01 M pH7.4 PBS將血紅蛋白凍干粉稀釋成2500 μg/ml至24 ng/ml共15個(gè)濃度梯度,用自制的鼠源抗血紅蛋白單抗(2B8)進(jìn)行膠體金標(biāo)記,用自制的的另一株鼠源血紅蛋白單抗(4G7)包被硝酸纖維素膜,按“雙抗體夾心”金標(biāo)免疫層析檢測(cè)試劑產(chǎn)品的制備工藝并進(jìn)行陰陽(yáng)符合率、穩(wěn)定性及CV值檢測(cè)。結(jié)果顯示:最低檢測(cè)線24 ng/ml,靈敏度高,最大檢測(cè)上限2500 μg/ml,不會(huì)造成假陰性;在24 ng/ml---100 μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系(R2 = 0.9999),可定量檢測(cè)。

  • 臨床對(duì)比

408份大便隱血便樣來(lái)自蘭州大學(xué)第二醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心,對(duì)比試劑A(醫(yī)院檢測(cè)用試劑)和對(duì)比試劑B均為國(guó)內(nèi)臨床檢驗(yàn)中使用量較大的FOB金標(biāo)檢測(cè)試劑產(chǎn)品。結(jié)果顯示:自制金標(biāo)檢測(cè)試紙條的陽(yáng)性率為61.3% 高于同類金標(biāo)對(duì)比試劑A(44.4%)和金標(biāo)對(duì)比試劑B(47.5%),結(jié)果見表1和圖2
1:自制試劑及對(duì)比試劑對(duì)大便隱血樣本檢測(cè)結(jié)果

 

  自制試劑 對(duì)比試劑A 對(duì)比試劑B  1:自制試劑及對(duì)比試劑對(duì)大便隱血樣本檢測(cè)陽(yáng)性率
樣本數(shù) 408 408 408
陽(yáng)性 250 181 194
陽(yáng)性率 61.30% 44.40% 47.50%


 

  • 特異性

自制試劑大便隱血(FOB)檢測(cè)試劑檢測(cè)人和不同動(dòng)物血紅蛋白試驗(yàn),以膠體金定量?jī)x器檢測(cè)的Dr值為參照進(jìn)行比較。
2 Hb單克隆抗體與其他動(dòng)物來(lái)源Hb交叉反應(yīng)結(jié)果

Hb濃度
(μg/ml)
人Hb 牛Hb 豬Hb 羊Hb 雞Hb
100 0.934 0.035 0.035 0.032 0.03
50 0.825 0.033 0.033 0.031 0.032
25 0.629 0.032 0.03 0.033 0.036
12.5 0.425 0.034 0.032 0.033 0.03
6.25 0.393 0.031 0.035 0.036 0.032
3.125 0.332 0.036 0.036 0.034 0.031
1.56 0.282 0.031 0.032 0.03 0.031
0.78 0.236 0.032 0.03 0.03 0.035
0.39 0.204 0.036 0.031 0.035 0.032
0.195 0.169 0.034 0.034 0.031 0.031
0.0975 0.146 0.031 0.031 0.035 0.032
0.048 0.183 0.03 0.035 0.034 0.03
0.024 0.106 0.03 0.032 0.03 0.03
陰性對(duì)照 0.032 0.033 0.036 0.035 0.033
 

以上實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明:
(1)人Hb抗鼠單抗與其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(牛、豬、羊、雞)Hb抗原沒(méi)有交叉反應(yīng);
(2)用間接法和雙抗夾心法做的人和其它實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清蛋白交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可以判定2B8和4G7特異性較強(qiáng)。

 
參考文獻(xiàn):
[1] 糞便潛血檢測(cè)定量法在結(jié)直腸癌及其他下消化道出血性疾病中的應(yīng)用分析

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